骨髓穿刺抽吸技術  

骨（gǔ）髓穿刺抽吸技術的早期（qī）發展主（zhǔ）要集中在人類醫學領域，隨後逐漸應用於動（dòng）物研究。最初（chū）的技術較為簡單，主要用於獲取骨髓樣本（běn）以進行血液學和病（bìng）理學分析。隨著研究需求（qiú）的（de）增加（jiā），骨髓穿刺抽（chōu）吸的技術逐漸得（dé）到了改進和優化，設備改進方麵引入了專用的骨髓穿刺針，這些穿刺針具備更好的設計可以減少組織損傷和（hé）提高樣本質量，以及在操作（zuò）過程中引入嚴格的無菌技術以減少感染的風險。

骨髓穿刺技術不僅在醫學研究中得（dé）到（dào）廣泛應用還擴展到多個領域。藥物研發，評估新藥（yào）對骨髓（suǐ）的影（yǐng）響，尤其是抗癌藥和免疫（yì）抑製藥物（wù）的研究中；毒理學研究中，同樣需要研究有毒物質對骨髓的影響；此外，基因治療，通過獲取骨髓細胞進行基因組（zǔ）研究和基因編輯實驗等都需要進行骨髓穿（chuān）刺。本文將介紹實驗犬的骨（gǔ）髓穿刺抽吸技術。

采集部位

對於犬，骨（gǔ）髓樣本通常從股骨轉（zhuǎn）子窩、肱骨近端或髂骨翼（yì）采集，其他部（bù）位包括胸骨、肋骨。如果骨盆和股骨區域含有豐富（fù）的脂肪組織，采集（jí）則會變得更具挑戰性。下文主要講（jiǎng）述犬肱骨近端骨（gǔ）髓采集的操作程序。

肱骨近端骨髓采集

材（cái）料（liào）和設備

○ 無（wú）菌手套（tào）

○ 電（diàn）動剪毛器和清（qīng）潔溶液

○ 局（jú）部麻醉藥（如利多（duō）卡因、布比卡因）

○ 含有2.5% - 3%乙二胺四乙酸溶液（EDTA約2 mL）的培養（yǎng）皿

○ 玻（bō）璃顯微（wēi）鏡載玻片

○ 顯（xiǎn）微血細胞比容毛（máo）細血管（guǎn）（圖A），有毛細血管球

○ 11號手術刀片

○ 無菌紗布

○ 10或12ml注射（shè）器

○ 14G至（zhì）18G帶針芯的骨髓針（圖（tú）B和（hé）C）

A：骨髓穿刺所需的材料和設備（bèi）

B：帶蓋和針芯的穿刺針

C：已（yǐ）移除蓋和針芯的穿刺針

操作步驟

1、在進行深度（dù）鎮靜（jìng）或（huò）全身麻醉後，動（dòng）物（wù）側臥位（wèi），修剪采集（jí）部位的毛發，可（kě）以在采集（jí）部位皮下注射局部麻醉劑（如利多卡因、布（bù）比卡因（yīn）），采集部位無菌清（qīng）洗。如圖1A。

圖1A：動物側臥位，采集部位（wèi）的毛發已剔除（chú）。

2、打開並佩戴無菌手套。助理輔助將（jiāng）穿刺針、注射器和手術刀片打（dǎ）開並放入無菌區域，或將這些物品以無菌的方式遞給術（shù）者。使用10或12ml的注射器，在保持無菌的情況下，抽取約1ml的EDTA溶液。如圖1B 。

圖（tú）1B：從培養皿中抽取EDTA溶液（yè）

3、將注射器（qì）放（fàng）置在無菌區域內（nèi）。移除穿刺（cì）針的蓋（gài）子和針芯，通過（guò）順時針旋轉確（què）保針頭的防護裝置牢固地連（lián）接在（zài）針頭的基（jī）部。將含有（yǒu）EDTA的注射器連接（jiē）到針頭（tóu）的頂（dǐng）部（bù）並旋緊。通過將EDTA噴回培養皿來灌注針頭，留（liú）下約0.5 mL的EDTA在注射器中。灌注時保持在培養皿上方，不要讓無菌針頭的尖端接觸培（péi）養皿，然後將注射（shè）器從針頭上移除，置於無菌區域內。重（chóng）新裝上針芯和蓋子。注：在大型犬中，可以（yǐ）移除針頭（tóu）防護裝置，以方便進（jìn）入髓腔。如圖1C。

圖1C：用EDTA溶液灌注穿刺針（zhēn）

4、觸摸並確定肱骨近端外側的平坦（tǎn）區（qū）域（yù），位於（yú）大結節的遠端。確定肩胛骨和（hé）肱骨之間（jiān）的肩關節，以確（què）保不會誤采到該（gāi）區域（yù）。在平坦區域正上（shàng）方的皮膚上切開一個小口。如圖1D。

圖1D：在肱骨近端外側的平坦區（qū）域切開一個小口

5、牽拉皮膚，將針頭（tóu）“彈入（rù）”切口，確保針頭已穿透（tòu）深層皮下組織。重新確認肱（gōng）骨近端外側的平坦區域，位於大結（jié）節的遠端。將針尖直接放在（zài）骨頭上，垂直於平麵。以順時針和逆時針旋轉的方式適度施加（jiā）壓力，直至針頭（tóu）穿透近端（duān）骨皮質。穿透皮質（zhì）後，減小角度，使針頭朝向肘部（bù），平行於髓腔。繼續（xù）扭（niǔ）轉，直到針完全嵌入（rù）骨內。如圖1E。

圖1E：穿刺（cì）針彈入切口

6、移除蓋（gài）子和針芯，並迅速連接含有EDTA的（de）注射（shè）器（qì）。抽（chōu）吸（xī）至可（kě）見紅骨髓（2 ~ 5 mL足夠），並將內容物排出到培養皿。如圖1F。

圖1F：將骨髓吸（xī）入裝有EDTA的注射器

7、骨髓包含在白色的針狀（zhuàng）物中，表明穿刺（cì）成功。使用毛細管或帶有毛細管（guǎn）球或移液管球的巴斯德移液管取出（chū）並排出（chū）這些顆粒，用（yòng）於（yú）血塗片製（zhì）備。每片至少需要1個針狀物；然而，建（jiàn）議每張（zhāng）載玻片至少有3 ~ 5個較（jiào）大（dà）的（de）針狀物，以進行充分評估。任何剩餘的骨髓內容物都可以收集到EDTA管中，並與（yǔ）載玻片一起送（sòng）往實驗室。如（rú）圖1G。

圖1G：使用巴斯德吸管取出顆粒以製備血塗片

8、在動物恢複後給與鎮痛藥物（wù），並根據需要繼續使用。

潛在的不良反（fǎn）應、緩解措施或治療方法

1、采樣部位感染，但這種情況很少見

2、對軟組織如神經、肌肉和關（guān）節表麵的創傷

3、采樣部位出血

4、術後疼痛

緩解措（cuò）施

○ 密切注意無（wú）菌技（jì）術

○ 仔細辨別解剖標誌（zhì），準備骨骼/骨標本以正確找到解（jiě）剖標誌，避免對周圍組織造成意外創傷（shāng）

○ 對采樣部位施加直接壓力（lì），髓內出血不會引起大（dà）的問題（tí），因為（wéi）血液會迅速被吸收

○ 術後疼痛通常是短暫的，鎮痛藥用作鎮靜（jìng）/麻醉的預藥通常是足夠的，但如（rú）果需（xū）要也（yě）可以（yǐ）在術後使用

小結

為了提高骨髓穿刺抽吸的成功（gōng）率和樣本質量，必須製定全麵的標準操作程序（SOP），涵蓋動物準備、麻醉管（guǎn）理、穿刺操（cāo）作及樣本處理等各個環節，並對實驗人員進行係統且廣泛（fàn）的培訓。此（cǐ）外，實驗研究人員（yuán）應持續優化和改進技術，精細化操作流程，提升效率與準確性，從而為生物醫學研究提供高質量的樣本和可靠的數據（jù）支持（chí）。