非人靈長類動物（NHP）精液樣（yàng）本采集有多種目的，包括生（shēng）殖研究、物種保護、傳染病研究以及在藥物（wù）開發過程中評估生殖安全性。在（zài）生物醫藥研究中最常見的精液采集方法是電刺激和陰（yīn）莖振動（dòng）刺（cì）激。電刺激是利用電流刺激NHP動物（wù）產生射精的過程。最常用的電刺激方法是直腸探（tàn）針電刺激法（RPE）和陰（yīn）莖電刺激法（PEP）。據報道，直腸探針電刺激產生（shēng）的樣品精子濃度低於陰莖電刺激。因此，它通常被認為不太適合於（yú）精液樣本的定量（liàng）評價，而用於定性分析。陰莖電刺（cì）激最（zuì）常用於收集精子進行定量分析，例（lì）如（rú），測定精（jīng）子數量和/或濃度，因為該方法采集到（dào）的精液量較大（dà）。而對於小型非人靈長類動物（如鬆鼠猴和（hé）狨猴），陰莖振動刺激法（fǎ）（PVS）是比電刺激法更優的采精方法，因為它更適合這些動物的生理特點，同時對（duì）動物的福利影響較小。

直腸探針電刺激法（RPE）

描（miáo）述：這是較早使用的NHP采精方法。通（tōng）過直接刺激（jī）盆腔器（qì）官周圍的（de）神經肌（jī）肉，導致（zhì）盆腔器官收縮和放鬆，從而排出內（nèi）容物。該過程需要對動物進行輕（qīng）度麻醉，但不需要對動物進行（háng）訓練。操作者的技術和培訓對程序的成功至關重要。

操作步驟：動物被輕度麻醉後側臥或在保定架上俯臥，使用合適大小的探針，在插入探針前，電極（jí）需輕磨、衝洗和消毒。陰莖被輕（qīng）輕拉出（chū）並（bìng）清潔（可用無（wú）菌生（shēng）理鹽（yán）水），然後在探（tàn）針上塗上一層薄薄的水溶性潤滑凝膠。探針電極（jí）需對準前（qián）列腺，為了確保電極（jí）與前列腺接觸，可（kě）將探頭的另一（yī）端抬起，輕輕向下按（àn）壓探頭的尖端。通過逐漸（jiàn）增加電壓直到動物（wù）出現腿部伸展等反（fǎn）應（yīng），確定動物的電壓設定點。達（dá）到反應點後，電壓保持不（bú）變（biàn）一段時間（最多約5秒（miǎo）），然後逐漸降低（dī）。這種電壓的逐步（bù）增加、保持和降低構成了一（yī）個（gè）完（wán）整的刺激周（zhōu）期。通過（guò）多次刺激，通常三組刺激可以產生射精。在整個刺激過程中，陰莖的尖端需要保持在預熱（rè）的玻璃燒杯或其他收集容器上方（fāng）。

適用（yòng）場景：由於（yú）這個方（fāng）法產生的樣本精子濃度較低，因此更適合用於定性分析，如檢測精液中精子的存在以確認性成熟，以及評估精子細胞的形態。

陰莖電刺激法（PEP）

描述：該方法通過刺激陰莖中的傳入神經末梢（shāo），隨後將刺激傳遞到與陰（yīn）莖勃起和射精相關（guān）的傳出（chū）神經通路。該方法在動物清醒狀態下（xià）采集，傳統（tǒng）的保定方式是使用猴杆或者頸圈將動物固定在開放式（shì）的（de）猴椅上，但近期有研究表明使用封閉箱椅（closed box chair）是一種更優化的保定方（fāng）式，可以訓練動物直接從籠子進入封閉箱椅內，對動物福利、精液質量都（dōu）有顯著改善。PEP已被證明能夠更好地刺激整個生殖道（dào），並且由（yóu）於無需麻醉，減少了尿液汙（wū）染和精（jīng）液樣本稀釋的問題（tí）。此外，與直腸探針（zhēn）法相關的逆行射精（精液（yè）進入膀（bǎng）胱）的風險在（zài）陰莖電刺激法中被最小化。這種非侵入性技術確（què）實需要對動物進行訓練（liàn），並且需要控製實驗（yàn）環（huán）境（例如（rú）安靜（jìng）的房間（jiān）、熟悉動物的工作人員（yuán））。與直腸探針電刺激技術相比，這種方（fāng）法可（kě）能需要更長的時間來（lái）獲取樣本，但通常不會超過幾分鍾。陰莖電刺激法的一個潛在缺點是，有些動物對陰莖刺激沒有反應，因此無法提供精液樣本。

操作步驟：將陰莖輕（qīng）輕拉出，用潤滑凝膠包裹的除顫（chàn）器墊包裹陰莖，將（jiāng）電極連接到電刺激器設備上。從低（dī）電（diàn）壓開始刺激（根據動（dòng）物的品種和體格）不超（chāo）過15秒，逐漸增加到預設的最大值。每次刺激時，觀察動物的生理反應和射精（jīng），整個過程通常不超過3次刺激。不同品種的（de）電壓刺（cì）激相差較大，對於食蟹猴而言（yán），可以從10-30伏特開始，如果（guǒ）需要，可以以 5-10 伏特的增量逐（zhú）步增加，最高至約50 伏特。在刺激（jī）過程中（zhōng）將收集管放在陰莖尖端以（yǐ）收（shōu）集射精的精液樣本。

適用場景：該方法適用於需要較高精子數量和質量的場景，如體外受精（IVF）或（huò）單精子卵胞漿內注射（shè）（ICSI），因為其（qí）能（néng）獲得更高（gāo）的精液量和精子濃度。

陰莖振動刺激法（fǎ）（PVS）

描述：該方法利用自然反射，產生正（zhèng）常的射精（jīng）反（fǎn）應，從而獲得自然射精。使用經過改裝（zhuāng）的振動設備（bèi），並配備收集容器。該方法通常將清（qīng）醒的動物保定在猴椅上，並在黑暗的房間中進行（háng），避免動物（wù）過（guò）於激動（dòng）。

操作（zuò）步驟（zhòu）：將陰莖輕輕從包（bāo）皮鞘中拉出，將振動玻璃（lí）管放在陰莖尖端（duān）並保持接觸。根據動物對刺激的反應逐漸調整振動參數，並在刺激期間提供休息（xī）時間。如果（guǒ）在15-20分鍾內未達到（dào）射精，則停止刺激。

適用場景：在小（xiǎo）型非人靈長類動物（如鬆鼠猴和狨猴）中，PVS是首選方法（fǎ），因為這（zhè）些動物體型較小，直接放置電極進行陰莖刺激較為困難，且直（zhí）腸探針法在這些小型NHP物種中也不太適用，較小（xiǎo）的生殖道和消化道結構可能無法讓直腸探針精準放置（zhì）。

同時，對鬆鼠（shǔ）猴和狨猴的研究發現，與 RPE 采集的樣本相比，振動刺激采集的精液樣本中精子和（hé）附屬腺的產（chǎn）生顯（xiǎn）著增加。PVS 可產生質量更高的（de）射精（jīng），結合了（le）不需要鎮靜或輕度麻醉的優點，幾乎不引起不適，並產生無汙染的自然射精。

無論采用何種（zhǒng）精液采集（jí）方法，均應慎重考慮（lǜ）采（cǎi）精動物的選擇。確認精子發生（通過（guò）檢測精液（yè）中的精（jīng）子）是（shì）確認 NHP 性成熟的最（zuì）可靠方法。在一些 NHP 種屬中，精（jīng）液采（cǎi）集時間應考慮季節性。在此類確認之前，可通過應用常規選擇標準（如（rú）年齡、體重和/或睾丸體積）優化動物的選擇。睾酮由於其脈衝式/晝夜（yè）節律性波（bō）動和動（dòng）物間個體差異較大，並不是可靠判定性（xìng）成熟的指標。

性成熟的（de）具（jù）體標準還取（qǔ）決於動物的種屬甚至地理來源。例如，來自毛裏求斯的食蟹猴已（yǐ）被證實從 3-4 歲開始性（xìng）成熟（精液中的（de）精子），而來自亞（yà）洲（zhōu）大（dà）陸的食蟹猴（hóu）需要額外（wài）一年（> 4 歲）才能達到性成熟。關（guān）於食蟹猴和恒河（hé）猴的文獻（xiàn）表明，小於4歲和體重小於4kg的動物不太可能性成熟。

精液采集操作的福利考量

在精液采（cǎi）集時，也應關（guān）注動物福利的問題，比如直腸探針電刺激法（RPE）比其他采（cǎi）精技術（shù）更具侵入（rù）性，因（yīn）為該（gāi）方法需要將探（tàn）針插入動物的直腸，直接刺激前列腺和盆腔器官，可能會對（duì）動物（wù）造成（chéng）一定（dìng）的不適或潛在的生理損傷。因此（cǐ）在進行直（zhí）腸探針電刺激前，應仔細（xì）檢查直腸是否存在異常，如瘢痕（hén）、狹窄（zhǎi）或痔瘡。操作者需要密切監控動物的反應和身體狀況，定期檢查（chá）是否有出血或組織損傷的跡象。一旦發現異常，應立即（jí）停止操作並給予動物恢複（fù）的時間。同時，提供必要的操作後護理和采精頻率的限製（zhì）也是確保動物福利的重要措施。

而陰莖電刺（cì）激和陰莖震動刺激法雖然無創，動物也（yě）是無需麻醉在猴椅或者封閉箱椅中操作，因此操作過程（chéng）中應（yīng）關注（zhù）的是（shì）對（duì）動物進行馴化（huà）和保定適應，減少動物（wù）的應激。同時（shí）在電刺激時應嚴格控製（zhì）給予刺激的電（diàn）流（liú），以及電（diàn）刺激的（de）次數。

通過上文描述，可以看出選擇合適的動（dòng）物以及合適的方法才能夠采集到合適的樣（yàng）本，同時應（yīng）關注動（dòng）物的福利問題，最大程度減少對動物的不利影響。