非人類靈長類（lèi）動（dòng）物腦脊液采集指南

目的

靈長類獸醫協會（huì）（APV，Association of Primate Veterinarians）意識到在非人類（lèi）靈長類動物（NHP，Non-human primate）中，腦脊液（yè）（CSF，Cerebro-Spinal Fluid）的采集可能對於臨床和生物醫學研究都是必需的。由於這項（xiàng）技術存在固有（yǒu）風險，實驗動物獸醫應確定腦脊液（yè）采集對臨床評估的必要性和實用性。為了生物醫學（xué）研究目的而進行腦脊液（yè）采集須（xū）在動物護理和使用委員（yuán）會（IACUC，Institutional Animal Care and Use Committee）或等同的監管機構批準下進行。以下建議為IACUC、使用非（fēi）人類（lèi）靈長類動物模型的研究人員以及獸醫（yī）人員提供基本信息，以供在製定腦脊液（yè）采集相關的政策和標準操作程序（SOP，Standard Operating Procedure）時予以考慮。

背景

腦脊液分析是一種（zhǒng）強大的（de）工具，可（kě）加強對中樞神經係統內發生的各種過程的檢測，例如（rú）：出血、炎症、感染、腫瘤和（hé）其他臨床情況。此外（wài），對腦脊液中化合物（如激素、藥物（wù）、神經遞質、生（shēng）物標誌物（wù）、代謝產物（wù）和病毒）進行係列評估，在基礎研究和轉化研究中同樣非常重要。中樞神經係統（tǒng）中的腦脊液體積可通過腦脊液的分泌和吸收而維持穩定。

操作注意事項（xiàng）

腦脊液通常（cháng）通過腦池或腰椎間隙穿刺采集。其中，通過腰椎穿刺采集腦脊液的並發（fā）症風險相對較低。因為在大多數非人（rén）類靈長類動物中，腰椎穿刺位點遠（yuǎn）離脊髓的末端（duān）。應適當麻醉動物，並使用無菌技術進（jìn）行操作，包括剃毛等術部（bù）準備和（hé）無菌材料的使用。至少需（xū）使用無菌手套、注射器和針頭，還可考慮使用無菌手術創（chuàng）巾。腦脊液采集通常以側臥位、胸骨臥位或坐位進行，分別通過頸部或（huò）脊柱（zhù）的屈曲來改善對（duì）腦池的（de）進入或擴大椎間隙（Gereschlager，1987；Magden，2015；Wolf，2012）。選擇的針（zhēn）頭尺寸和長度應適合非人類靈長類動物的種屬（shǔ）和體型（xíng）（Brady，2000；Cereschlager，1987；Magden，2015；Wolf，2012）。操作時使用的技術、設備和耗材，以及圍（wéi）手術期的護理因動物種屬、研究目的和臨床獸醫的偏好而不同。

有些研究方案可能需隨時間推移而連續（xù）采集腦脊（jǐ）液，或（huò）需采集未麻醉的受試對象的腦脊液樣本。對於這些方案，可通過長期植入的腦脊液穿刺（cì）導管（guǎn）從清醒狀態的恒河猴身上連續采集腦脊液，而該導管可連接至皮下（xià）的采集接（jiē）入口（Gilberto，2003；Gilberto，2022；MacAllister， 2016）。

在編寫本文件時，作者盡一切（qiē）努力尋找總（zǒng）腦脊（jǐ）液體積的數值、硬腦膜穿刺的（de）次數限製或建議、采（cǎi）集頻（pín）率（lǜ）、安全的抽取體積以及腦脊液補充速率（lǜ）相關的最（zuì）新（xīn）參（cān）考（kǎo）文獻。對於大多（duō）數靈長類動物，這方（fāng）麵（miàn）的文獻很有限。此外，采集方法也各不相同，因為從靈（líng）長類獸醫協（xié）會成員（yuán）收集的調查結果表明（míng），各機構（gòu）均可成功地使用多種不同的方法采集腦脊液。因此，作者根據現有的最佳證據提供了腦脊液采集的考慮因素和建議。

作為參考，先前的研究（jiū）已確（què）定成年雄性恒河猴（8.0-10.6kg）的表觀腦脊液體積為10+/-0.06 mL，腦脊液流（liú）速為0.018+/-0.003 mL/min（McCully，2020）。恒河猴的（de）腦脊液形成速率範圍（wéi）為28.6-44.2 μL/min（Curran，1970；Lux，1975；Martins，1977）。在這方麵需要對非人靈長類動物進行進一步的研究，以促進更具指導性建議的製定。

潛在不良反應

雖然在非人類靈長類動（dòng）物中進行腦脊液采集時報道的並發症很少，但解剖變異以及不適當或（huò）技（jì）術不佳的操作方（fāng）法可能（néng）導致樣本受損或並發症，如出血，腦（nǎo）疝，感染，腦幹、脊髓或神經根損傷以及動物的不適。這些並發症雖然罕見，但可能會損害動物福利。

由於存在（zài）風險，應由獸醫或經過培訓的獸醫人員采集腦脊液。對於未成功的腦脊液采集嚐試，實（shí）踐可能有所不同（tóng）。常見做（zuò）法是允許一個人進（jìn）行最多三次未成功的嚐試。在（zài）第三次嚐試失敗後（hòu），應由另（lìng）一位合格的人員接替（tì）。如果第二個人在三次嚐試後（hòu）仍（réng）無法采集到腦脊液，則停止嚐試。同時動物將接受適當的鎮（zhèn）痛治（zhì）療，並從麻醉中恢（huī）複。在嚐試失敗後（hòu）更換采集部位（例如從腦池到腰椎）通常可成功。如果是未進行成像的失敗嚐試，則可使用（yòng）X線透視輔助穿刺針放置。除提高成（chéng）功率外（wài），影像引導（dǎo）還可降（jiàng）低創傷性（xìng）穿刺的發生率。（Eskey，2001）

術後監測（cè）應持續進行，直到動物返回其籠內，並能在沒有支撐的情況下保持（chí）直立姿勢。對動物的監測（cè）應該至少持續24小時或根據IACUC批準的方案進行。監測應包括（kuò）對基本的生理、行為和運動參數的評（píng）估。尤其應評估動物（wù）是否出現神經功能障（zhàng）礙的跡象，包括（kuò）但不限（xiàn）於嗜睡、抑鬱、昏迷和頭部壓迫感等。在人（rén）類醫學中，腦脊液采集後出現（xiàn）的頭痛和由此引起的顱內低壓並不少（shǎo）見。考慮到非人類（lèi）靈長類動物中的（de）這種（zhǒng）潛在後遺症，應在手術時給予鎮痛治療，並延長2-3天，或根據與頭痛或脊柱疼痛相關行為的術後觀察結果按需提供鎮痛治療（liáo）。最有效的鎮痛（tòng）方案（àn）可能是術前即開始（shǐ）綜合治（zhì）療。

IACUC注意事項和記錄保存

IACUC應了解腦脊液采集的相關工作以及所有可能的並發症，並至少每年對其審查。所有（yǒu）相關信息，如藥物劑量（liàng）、術前準備、采集的腦脊液（yè）體積、采集頻（pín）率以及術後短期和（hé）長期恢複情況，均應在IACUC方案中進行描述，並在醫療記（jì）錄或實驗室日誌中適當地記錄。

腦（nǎo）脊液可能是研究方案中（zhōng）的（de）關鍵資料，但如果采集技術不恰（qià）當，可能會對（duì）動物福利產生影響（xiǎng）。遞交方案時，應提供采集次數和頻率的科學依據。具體而言，IACUC還應仔細評估涉及腦脊液采集的每個（gè）提案，並考慮以下（xià）問題：

1.腦脊液采（cǎi）集（jí）是否對實現方案中所述的科學目標（biāo）至（zhì）關（guān）重要？

2.是否有替代（dài）方法和侵入性較小的中樞神經係統評價方法（如成像（xiàng）技術）可（kě）供選擇（zé），如果有，是否考慮過？

3.操作人員是否（fǒu）接受過適（shì）當的培訓並具備足夠的技能？

4.是（shì）否將（jiāng）提供適當的圍手術期麻醉和鎮痛方案？有關麻醉和鎮痛計劃，應谘詢（xún）實驗動物獸醫。

5.采集的（de）腦脊液體積是否符合動物的年齡和體型考慮？

6.腦（nǎo）膜穿刺（cì）的次數和頻率是否（fǒu）適（shì）合動物，以及（jí）並發症風險是否已降到最（zuì）低？如果多次采集腦（nǎo）脊液為研究的一部分，應明確規定每（měi）隻動物（wù）的最大采集次數。

7.術後監測（cè）計劃是否適當？

8.是否（fǒu）考慮了所（suǒ）有可能的（de）術後（hòu）並發症，並列出了所有合理（lǐ）的幹預方法，包括安樂死？

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