續（xù）接（jiē）上篇

GA和突（tū）變係的（de）背景特征

GA品係數量（liàng）的（de）激（jī）增加劇了實（shí）驗齧齒類動（dòng）物中未定義的“混合背景”問題。這對於那些需（xū）要用兩個獨立品係通（tōng）過雜交子代（dài）開展（zhǎn）的誘導性和條件性GA模型可能（néng）要給與更高的關注，例如Cre小鼠與Floxp小鼠的雜交。

需（xū）特別關注（zhù）GA品係背景的（de）原因是即使擁有相同的突變基因，但如（rú）果動物遺傳背景不同，也可能表現出不同的表型。最早報道的案例之一是經典的糖尿病基因位點(Leprdb)突（tū）變，它在C57BL/6背景下會出現短暫的高血糖症，但在C57BLKS背景下卻出現明顯的糖尿病症狀（zhuàng）。其他例子（zǐ）包括動物遺傳背景會對Egfr(表皮生長因子受體)敲除（chú）小鼠生存率造成影（yǐng）響，以及對Pten敲除小鼠的腫瘤發病率造成影響等。因此，每個GA品係都應該對其（qí）遺傳（chuán）背景進行確認（rèn），了解其在現有的遺傳背景下是否會對預期表型有影響，從而選擇更合適的遺傳背景及對照動物。

對（duì）均勻分布，覆蓋全基因組的遺傳標記進行掃描，可以（yǐ）用於評估來自不同近交係的基因（yīn）的（de）比例，典型的遺傳背景界定主要用於區分（fèn）有可能混合的近（jìn）交係背景。目（mù）前大部分應用的場景是去區分C57BL/6和（hé）129的亞係，因為在構建基因敲除/敲（qiāo）入小鼠時（shí），大（dà）量應（yīng）用的是129來源（yuán）的ES細胞，而幹細胞注射用（yòng）的囊胚供體通常會利用野生型的C57BL/6小鼠，因此如果在後續繁育中沒有進（jìn）行回交，通常（cháng）會得到B6;129混合遺傳背景的後代（dài）。混合遺傳背景的問題可以通過以下方法避免：

（a）將轉基因或（huò）核酸酶（méi）（Cas9-sgRNA）注入選定背景的近交係胚胎。

（b）在選定（dìng）背（bèi）景品係來源的ES細胞中修（xiū）改感興（xìng）趣的基因。

（c）將（jiāng）嵌合體與用於構建的ES細（xì）胞來源背景相同的小鼠（shǔ）品係進行雜交（jiāo）。

對於現（xiàn）有的GA品係，有（yǒu）必要去確認其遺傳背景，如果（guǒ）需要在單一背景上建立品係（xì），則需通過回交或是在遺傳標記輔助下回交的方（fāng）式進行。定期用背景品係進行回交也能最大限度（dù）地使遺傳背景保存一致。

遺傳穩定和冷凍保存方案

對於近交係、染色體置換係和同源係，育種方法和遺傳穩定計劃有助於最大限度地（dì）減少由於遺傳漂變造成的亞（yà）係（xì）分化（huà），也有助於（yú）防止與其他品係意外雜交造成的遺傳汙染。為了減（jiǎn）少遺傳漂變，應盡量減少內部（bù）育種的傳代次數，並將品係委托給專業機構通（tōng）過冷凍胚胎和/或精子保存，國外如JAX、EMMA、MMRRC、IMSR、RIKEN，國內如國家遺傳工程小鼠資源庫等。同時應按照傑克遜實驗室遺傳穩定計劃(GSP)的建議，每10代（dài）更換一次繁殖種群，以減緩遺傳（chuán）漂變的積累。對於遠（yuǎn）交係，應盡量減少近親繁殖，保持雜合度，同時也要管（guǎn）理遺傳漂變，否則會導（dǎo）致品係分化。 理想情況下，遠交（jiāo）係的種群應該保持至少25個繁殖對，每代近交係數都應控製在1%以（yǐ）下。

胚胎（tāi）和配子的冷凍保存策略已被多個儲存庫采用，包（bāo）括歐洲小鼠突變資（zī）源庫（EMMA/INFRAF RONTIER)、基因敲除小鼠計劃(KOMP)、傑克遜實驗室、動物資源與發展中心（xīn）(CARD) 和（hé）RIKEN生物資源中心。它們可以向實驗室提供冷凍（dòng）保存（cún）的材料（liào）或活體小鼠。這些儲存庫有助於向全世界（jiè）的科學界提供已經建立的品係，並為（wéi）可能丟失的品係提供備份。國際小鼠品係數據庫(IMSR)是一個可在線搜索的數據庫，集成了世界範圍內的小鼠品係、庫存和突變ES細胞係，包含近交係、突變係和基因工程小鼠。

參考文獻：

[1] Benavides F , T Rülicke,  Prins J B , et al. Genetic quality assurance and genetic monitoring of laboratory mice and rats: FELASA Working Group Report:[J]. Laboratory Animals, 2020, 54(2):135-148.