摘要

小鼠屍（shī）檢的主要目的是通過肉眼觀察確定基因工程小鼠或患病小鼠（shǔ）的解（jiě）剖特征，並描述導致發病率和死亡率的病變。為後續檢查采集的（de）組（zǔ）織需要適（shì）當處理和保存，以防止變質。

因此，高效的常規操作對於促進組織學和確保（bǎo）高質量的樣本（běn）至關重要。此外，優化技術（shù）最（zuì）大限度地減少了損壞樣本的數據丟失，減少（shǎo）了使用的動物（wù）數量，並支持3Rs“reduction”原則。

在本文中，我們提供了一種用（yòng）於小鼠組織采集的優化方法，也包括培訓技（jì）巧（qiǎo）和注意事項。

前言（yán）

小鼠（shǔ）屍檢（jiǎn）是一（yī）種（zhǒng）以係統方式進行的死後科學（xué）檢查，能夠觀（guān）察大體解剖並采集組織，作為實驗終止研究或動物健康篩查的一部分（fèn）。小鼠（shǔ）屍檢在技術上具有（yǒu）挑戰性，各組操作人員之間的技術差（chà）異可能影響數據的（de）可比性。

因此，製定一個標（biāo）準化的方案和密切監測人員培訓非常重要，以保持操作一致性（xìng）和采集的組織（zhī）質量。簡單的術語表（biǎo）有助於確保操（cāo）作者之間的描述的（de）一致性。

本文中的方法平均需要2個小時左右就可以掌（zhǎng）握，如果熟練操（cāo）作（zuò），10分鍾左右就能夠完成1隻小鼠的（de）解（jiě）剖操作。在操作組織或（huò）化學（xué）試劑（jì）時，需要佩戴（dài）適宜（yí）的PPEs(防護眼鏡、手套、白大褂和口罩等)。

注意：在解剖實驗動物（wù）前，必須進行培訓以掌握解剖技巧。

解剖前準備

本文所描述的解剖操作是在兩隻16周齡（líng）的B6J小（xiǎo）鼠（雌雄各1隻）上進（jìn）行的。其飼養條件為：IVC飼養，自由（yóu）采食飼料和飲水，符合動物福利。

如果需要（yào）生化檢測（cè）以補（bǔ）充大體（tǐ）觀察，在解剖前可進行終末（mò）采血(全（quán）身麻醉後進行)。一旦（dàn）采集了所有（yǒu）必要的樣本，必須對小鼠進行放血或使用其（qí）他安樂死方法。采血操作人員必須（xū）經（jīng）過培訓。

采集後的組織置於10%中性緩（huǎn）衝福爾馬林溶（róng）液中(10% neutral buffered formalin下文簡稱：10% NBF)，除非有其他要求。一些組織可以放置在無纖維吸墨紙上，以避（bì）免（miǎn）折疊，並便於在包埋和顯微分析時定（dìng）位。

提示:10% NBF需要預先準備好，對大（dà）多數組織具有良好的固定效果，理想的固定液與組織的比例至少為20:1。固定液（yè）體積不足會（huì）導致固定效果不良。

小鼠解剖具體步驟

對（duì）小（xiǎo）鼠實施安樂死。在確認小鼠死亡（wáng）後(即（jí）血（xuè）液（yè）循環停止)，在解剖前應用70%的酒精浸濕毛皮，以降低過敏（mǐn）原風險。

穿過腹側皮膚和（hé）腹肌，穿過（guò）胸腔（qiāng）的尾緣，在劍骨下（xià）方(圖1-A和1-B)，做一個腹部切口。

然後從兩側向恥骨方向切（qiē）開（kāi）腹部，然後穿過尾腹，切除整（zhěng）個腹側皮膚。切下的（de）腹部（bù）皮膚部分平鋪在一張紙上(圖1-C)。

√提示：確保切除的腹部皮膚部分足夠寬，並包含乳腺組織。

使用（yòng）26G 3/8針（zhēn）頭和5ml注射器吸取10% NBF對（duì）腸道和胃部組織進行灌注(圖1-D)，以減少（shǎo）自溶，因為小鼠死亡後腸內迅速發生（shēng）自溶。

√注意：灌注要（yào）適量，否則腸道過度（dù）膨脹可能導致破裂或過度拉伸。

然後摘下胃（wèi）腸道。輕輕按住胃，剪斷食道，剝離腸道。剪斷骨盆（pén）附近的結（jié）腸，盡可能完整的取下整個胃（wèi）腸道。

√提示：抬高小（xiǎo）鼠軀體（tǐ）可以使胃腸道遠（yuǎn）離腹腔，減（jiǎn）少剪斷結腸（cháng）時損傷其他組（zǔ）織的風險。

圖1 (A-S)小鼠屍（shī）檢

（am:腹肌（jī）；d:膈肌；di:二（èr）腹肌；i:腸道；l:肝髒；m:咬肌；o:食管；q:股四頭肌；s:皮膚；sc:脊髓；sg:唾液（yè）腺；sn:坐骨神經（jīng）；t:舌頭（tóu））

小心剪開肋弓到下頜骨的皮膚，以減少對唾液腺和氣管造成損傷(圖1-E)。下頜骨唾液腺附著在皮膚上(圖1-F)。

接下來，從靠近前肢的兩側切開胸骨和肋（lèi）骨，並穿（chuān）過兩側鎖骨(圖（tú）1-G)。

√提示：剪刀的一（yī）個刀片應該插入胸骨上切口，另一個刀片插入肋骨和鎖骨外側，避（bì）免損傷胸腺或心髒。注意:避（bì）免損傷胸骨，因為胸骨可用於評估骨髓（suǐ）。

使用26G3/8針頭（tóu）通過（guò）氣管緩慢向肺部灌（guàn）注（zhù）NBF(圖1-H)。

√注（zhù）意：避免多次穿孔氣管，因為（wéi）這會損傷組織。提示（shì）:為了有效進（jìn）行肺部灌注，可以將針頭彎曲成90度或保定小鼠（shǔ）頭部，以形成合適的針頭插入角度。

依次取下舌頭、下（xià）頜（hé）骨、甲狀腺、氣管、食道、心髒、胸腺和肺（fèi）。切斷二腹肌和咬肌（jī）之間的下頜骨，並輕輕摘取組織器官(圖1-I和1-J)。

一並取下肝髒和膈（gé）肌(圖1-K)，操作肝髒時要輕柔，因為肝（gān）髒易碎。

通過提拉輸尿管並切斷背側連接，取下雙腎及其相伴的腎上腺(圖（tú）1-L)。

如果是雄性動物，取下兩個睾丸並放入Hartmann’s固定液中。解剖兩個附睾並平放在紙上。將精囊、前列腺（xiàn）和（hé）膀胱整體切除（chú），平放於（yú）紙上(圖2-A至2-D)。

√提示：對於眼睛和睾丸等組（zǔ）織，使用Hartmann’s固定液(改（gǎi）良戴維森)(Cat. H0290-500ML; Merck Life Science)可減少組織收縮和確（què）保足夠的固定。

樣品應（yīng）在室溫下固定24-72小（xiǎo）時，然後轉移到10% NBF中（zhōng）。

如果是雌性動物，應切（qiē）開（kāi）恥（chǐ）骨，從卵巢到陰道口處，整個切除雌性生（shēng）殖道，(圖2-E至2-H)。一（yī）並（bìng）取下膀（bǎng）胱，但不包括（kuò）結（jié）腸（cháng），然後放置在紙上。

圖2  生殖道解剖，雄鼠(A-D)，雌鼠(E-H)。

（b:膀（bǎng）胱；c:結（jié）腸；e:附睾；o:卵巢；sv:精囊（náng）；t:睾丸；u:子宮角。）

剝去顱骨處的皮膚，並在眶間切開（kāi）顱骨(圖1-M)，以允許固（gù）定劑（jì）能夠滲透進大腦。雙眼應（yīng）連同視神經一起切除並放入Hartmann’s固定液中（zhōng）。

剝離從肩部到尾根（gēn）部的皮膚（fū），去除皮下組織，鋪平放在紙上(圖1-N)。

從一（yī）側後肢沿股骨切取（qǔ）股四頭肌(圖1-O)。通過（guò）分割股二頭肌暴露坐骨神（shén）經，取出並放在紙上(圖1-P)。

√注意：盡量減（jiǎn）少對坐骨神經的操作，因為它很容易損傷。

髖關節處取下剩餘的後肢（zhī）和後爪。這個樣本包含膝關節，可以脫鈣進行組織學檢查。

從寰枕間隙開始，切（qiē）除兩側椎（zhuī）弓，並切除和（hé）收縮背突，使脊（jǐ）髓暴露至腰椎區域(圖1-Q和1-R)。胴體放置在10%的NBF中(圖1-S)，並固定至少24小時。

√提示：脊髓暴露（lù）是操作中最具技術挑戰性的（de）部分。我們建議使用彎曲的和/或直的彈簧剪刀和胴體定（dìng）位(平放在解剖（pōu）台上或彎曲在手上)，以減少對組織（zhī）的張力。

總結

這種快速完整（zhěng）的小鼠屍檢方（fāng）法（fǎ）可以保存小鼠的所有組織，並最大限度地（dì）從單（dān）個標本中獲得數據。雖然（rán）必須考慮到物種之間的差異，但這種方（fāng）法（fǎ）很容易在大鼠、倉鼠、兔子等物種上複製。

不同的固定劑也可以用於滿足特定的研究需要。組織可以保存（cún）在（zài）福爾馬林中，或者在最短的固定時間後，可以修剪、加工、石蠟包埋、切片並（bìng）染（rǎn）色進行組織學分析。

注意（yì），任（rèn）何骨樣（yàng）本在（zài）包埋前都必須脫鈣，以使其更容易切割和避免破（pò）碎。

參考資料：

1.A guide to post-mortem examination procedure in mouse models，Alexandra Rodrigues1, Lynn Beresford1, Cheryl L Scudamore etc，Laboratory Animals 2022, Vol. 56(5) 466–470